产品规格:
N-乙酰氨基葡萄糖苷酶从复杂的碳水化合物和糖蛋白上切割所有非还原性末端 β-连接的 N-乙酰氨基葡萄糖残基。
GlcNAc 在双、三和四触角寡糖上的不同连接的切割率很大程度上取决于相邻残基的空间位阻。与 β(1-3) 连接的甘露糖连接的 β(1-2)GlcNAc 残基以最高的速率被切割,而与 β(1-6) 连接的甘露糖连接的 β(1-2) GlcNAc 残基在所有三种寡糖的低比率。β(1-6) GlcNAc 残基,当存在时,以第二高的速率去除,而 β(1-4) GlcNAc,第三。在三天线结构上,该残留物以第二高的速率被去除。与 β 连接的甘露糖相连的一分为二的 β(1-4) GlcNAc 严重阻碍了其他 GlcNAc 残基的裂解——裂解需要高浓度的酶和较长的孵育时间。
来源:重组从肺炎链球菌在大肠杆菌。
欧共体: 3.2.1.52
别名: β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶、N-乙酰基-β-d-氨基葡萄糖苷、N-乙酰氨基葡萄糖苷水解酶、氨基葡萄糖苷酶、氨基己糖苷酶
内容物:
N-乙酰氨基葡萄糖苷酶,溶于 20 mM Tris-HCl、25 mM NaCl,pH 7.5
5x 反应缓冲液 250 mM 磷酸钠,pH 5.0
比活度: >80 U/mg
活度: >50 U/mL
分子量: ~140,000 道尔顿
pH范围: 5-7,最佳5.0
建议用法:
1. 在试管中加入最多 100 µg 的糖蛋白或 1 nmole 的寡糖。
2. 用去离子水将最终体积调整为 14 µL。
3. 加入 4 µL 5x 反应缓冲液(pH 5.0)。
4. 加入 2 µL N-乙酰氨基葡萄糖苷酶。
5. 在 37°C 下孵育 3 小时。
注意:如果存在平分 GlcNAc 或 β(1-2)GlcNAc- α (1-6)Man,则将孵育国家时间增加到 18 小时。
特异性:切割所有非还原性末端 β-连接的 N-乙酰氨基葡糖。将 GlcNAc 一分为二会减慢反应速度。
比活性测定:定义为在 37°C、pH 5.0 条件下,从对硝基苯基-β-DN-乙酰氨基葡糖胺在 1 分钟内产生 1 µmole对硝基苯酚 ( p NP)所需的酶量
储存:将酶储存在 4°C。
纯度:每批N-乙酰氨基葡萄糖苷酶的污染蛋白酶测试如下;10 µg 变性 BSA 与 2 µL 酶一起孵育 24 小时。处理过的 BSA 的 SDS-PAGE 分析显示没有降解的迹象。
生产宿主菌株已经过广泛测试,不产生任何可检测的糖苷酶。
稳定性:如果储存得当,至少可以稳定 12 个月。暴露于环境温度数天不会减少活动。